用ImageJ测量强度

Question

我们必须使用imagej测量图像某些区域的荧光强度。我们提出了以下步骤来测量强度。虽然这似乎是正确的，但我的问题是--

1. 将图像设为8位

我们是否使用上述步骤正确测量平均强度数据？

Answer 1

在ImageJ中测量强度时，您需要注意以下几点：

1. ImageJ自动将图像转换为8位
2. 如果可用，您应该始终使用RAW
3. 如果你的显微镜不能将文件保存为RAW格式，你必须使用. tif，其他格式创建工件
4. 如果您使用. tif格式，请单独保存通道，而不是RGB堆栈

在阈值之前，您必须分割通道，特别是如果您正在寻找某个波长的花期。

您还需要在阈值之后使用“分水岭”函数，这样它将勾勒出单个单元格的轮廓，从而避免勾勒出一组整体在一起的单元格。通过这种方式，您可以测量它们各自的强度。但是，它并不完美，因此一旦ROI弹出，并且粒子分析已勾勒出细胞轮廓，您必须通过并确保它测量的是单个细胞。应删除包含多个单元格的任何轮廓。同时也要寻找形状奇特的细胞或微核，这些也应该被删除。

现在我假设你正在测量人类癌细胞。您应该使用以下设置：

在所有这些之后，然后应用覆盖。无论您覆盖在什么图像上，您也必须分割该通道，并使用包含您正在测量的波长的通道（即：Alexaflour 488将在GFP通道中）。

如果你一直在收集数据而没有这样做，我会把它全部扔掉，因为收集数据的过程没有控制任何东西。

还有去哪里问这个问题。