肌动蛋白（牛心脏 muscle）说明书

大量的疾病和疾病是由引起突变在等位基因的的基因调节生产肌动蛋白或其相关的蛋白质。肌动蛋白的产生也是一些病原微生物感染过程的关键。今天一起来看看艾美捷肌动蛋白（牛心脏 muscle）。

艾美捷 肌动蛋白（牛心脏 muscle）采用Pardee和Spudich法从牛心肌中纯化肌动蛋白。牛心脏肌动蛋白由84%的α心脏肌动蛋白和16%的α骨骼肌动蛋白亚型组成，分子量约为43 kDa。牛心脏肌动蛋白纯度大于99%，以白色冻干粉末的形式提供。

艾美捷肌动蛋白（牛心脏 muscle）生物活性测定：

心脏肌动蛋白的生物活性可以通过其在体外有效聚合成细丝并在降速分析中与未聚合成分分离的能力来确定。严格的质量控制确保在该试验中，90%以上的肌肉肌动蛋白可以聚合。

艾美捷肌动蛋白（牛心脏 muscle）试剂：

1、牛心脏肌动蛋白（Cat.#AD99）

一般肌动蛋白缓冲液（5 mM Tris-HCl pH 8.0，0.2 mM CaCl2；类别#BSA01）

3、聚合缓冲液（500 mM KCl，20 mM MgCl2，10 mM ATP；类别#BSA02）

4.ATP，100 mM溶液（类别#BSA04）

5.1 M DTT（二硫苏糖醇）

6、精密红色蛋白分析试剂（Cat.#ADV02）

艾美捷肌动蛋白（牛心脏 muscle）所需设备：

1、4°C下的微凝胶

2、Beckman Airbuge和Ultra Clear™ 离心管（Cat.#344718）、贝克曼超离心机和SW 55 Ti转子，带Ultra Clear™ 离心管（第344718类）和适配器（第356860类），或其他能够在100000 x g下离心200µl的超离心机。

3、能够在600 nm处测量吸光度的分光光度计。

方法：

1.在补充有0.2 mM ATP和0.5 mM DTT的普通肌动蛋白缓冲液中，将心脏肌动蛋白稀释至0.4 mg/ml。

2、在冰上培养1小时，以解聚储存期间形成的肌动蛋白低聚物。

3、将蛋白质在4°C微凝胶中以14k rpm离心15分钟。

4、将上清液转移到新的微滤管中，并用精密红色蛋白质分析试剂测定总蛋白质浓度。将等份200µl肌动蛋白溶液放入超离心管中。

6、向每个充气管中添加20µl（体积的1/10）聚合缓冲液，并充分混合。

7、在室温下培养1小时。

8、在100000 x g的条件下离心试管1小时，使聚合肌动蛋白颗粒化。

9、将每根试管顶部90%的上清液移到干净的微滤管中。

10、用精密红蛋白分析试剂测定上清液（未聚合单体肌动蛋白）中蛋白质的浓度。该蛋白质浓度用于确定离心期间肌动蛋白聚合和颗粒化的效率。